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鸡禽流感H9
鸡禽流感病毒(H9)抗体检测盒检测鸡血清中的禽流感病毒H9抗体，用于评估养鸡场鸡禽流感疫苗免疫状况及感染鸡的血清学辅助诊断。
本盒采用间接ELISA法，在酶标板微孔上预包被禽流感H9抗原。在试验中，加入稀释后的待检血清，经过温育后，若样品中含有禽流感H9特异性抗体，则与包被板上的抗原结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后；加入酶标二抗，与检测板上的抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶结合物；在微孔中加入TMB底物液，经酶催化形成蓝色产物，加入终止液终止反应后，用酶标仪450nm波长测定反应孔中的吸光度A值。
需自备的设备及
1.微量移液器： 0.5?l～10?l、10?l～100?l、100?l～1000?l。
2.一次性移液器吸头。
3.量筒：500ml。
4.96孔板酶标仪。
5.蒸馏水或去离子水。
6.洗瓶或洗板机。
样品制备
取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。
洗涤液的准备
浓缩洗涤液使用前应恢复至室温，如有盐结晶，摇动使结晶的盐溶解，然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。
样品的稀释
在血清稀释板中按1：101的体积比稀释待检血清（例如：200μl样品稀释液中加2μl待检血清）。
注意：阴性和阳性对照不用稀释。取每个样品后都要更换吸头，准确记录每个样品在板上的位置。每个样品在加入到包被板微孔前应充分混匀。
注意事项
3.底物和终止液对皮肤和眼可能有刺激性，使用时应该注意防护。
4.TMB（底物B液）不要暴露于强光和避免接触氧化剂。
5.检测板拆封后应避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中，并尽快置于2～8℃)。
6.所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。
7.严格遵守操作说明可以获得的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须。
8.血清稀释板为一次性de 用品，不得重复使用；血清稀释板的大容量为300μl/孔。
操作步骤
1. 取预包被的检测板（根据样品多少，可拆开分次使用），将稀释好的待检血清取100μl加入到检测板孔中。同时设阴性、阳性及空白对照各1孔，取阴性及阳性对照各100μl分别加入反应孔中，空白对照仅加入100μl样本稀释液。轻轻振匀孔中样品（勿溢出）。
2.盖上封板膜，置37℃温育30分钟。
3.小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，用洗涤液洗3次。每次用洗涤液注满板孔（约350μl），静置1分钟后甩掉。洗涤3次后在干净吸水纸上拍干。
4.每孔加酶结合物100μl，盖上封板膜，置37℃温育30分钟。
5.小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，洗涤3次, 方法同2。切记后在干净吸水纸上拍干。
6.每孔先加底物A液50?l、再加底物B液50?l，混匀、盖上封板膜37℃闭光显色10分钟。
7.每孔加终止液50μl，使反应终止，10分钟内测定结果。
结果判定
以空白对照调零用酶标仪于450nm（630nm作参比波长）读取吸光度A值。试验成立的条件是阳性对照孔A450值大于或等于0.5，阴性对照孔A450值必须小于0.2。如果试验无效，试验中的操作值得怀疑，试验应重做，并仔细检察各组分。
样品A450值大于0.2+阴性对照孔均值，判为阳性；样品A450值小于0.2+阴性对照孔均值，判为阴性；如阴性对照孔均值小于0.05按0.05计算。
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